• 《食品安全導刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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    Veriflow DNA簽名捕獲技術:創新性的食品致病菌、

    2017-08-11 15:56:18 來源:

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        Veriflow DNA簽名捕獲技術:創新性的食品致病菌、腐敗菌快速檢測方法
    □ 上海美凱純生物科技有限公司 供稿
        隨著食品加工業的飛速發展,國內外因致病菌、腐敗菌引起的食品安全和質量問題層出不窮,食品安全問題不斷挑戰著政府和百姓的底線,各個國家都將食源性病原微生物的檢測作為國家食品安全的焦點問題。新的法規、更嚴厲的懲罰、對品牌帶來風險的召回等都對食品生產者施加了巨大的壓力,同時也給監管人員和檢驗人員帶來了挑戰。所以市場環境需要食品安全、質量監控流程和模式作出轉變。
        食源性病原體診斷與檢測技術的研發和應用已成為預防和減少食源性疾病傳播的關鍵,因此對食品中復雜的混合微生物種屬進行及時監測和鑒定越發重要。但是傳統的檢測方法,如革蘭氏染色、菌落培養形態、生理生化特性等都是基于微生物及其生長代謝所表現的性狀來識別微生物,通常需要復雜的樣品前處理、多步增菌等步驟,這些步驟耗時長,受環境和微生物活性影響大,結果不可靠、不準確。而以PCR技術為主的分子生物學檢測技術雖然具有快速、敏感和特異性強的優點,但是仍然存在高成本、潛在的設備交叉污染、高假陽性率、操作繁瑣等問題。以上這些制約因素可能導致一系列重大問題,如生產效率低下、庫存積壓、將有風險的產品放貨、損失品牌價值等。
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    圖1
        上海美凱純生物科技有限公司引進了美國Veriflow DNA簽名捕獲技術,其致病菌和腐敗菌檢測系統(圖1所示)在各種PCR檢測技術中脫穎而出、獨樹一幟,是具有開創性的分子檢測技術。這一強大的平臺即使在最具有挑戰性的樣品基質中也能憑借簡單的樣品準備實現最高水平的檢測精確性。
        Veriflow®專利的DNA簽名捕獲技術能將實時PCR測試的靈敏度和基于垂直層析的診斷測試技術的易用性結合,使之能夠從復雜的樣品基質和環境中快速檢測目標分析物的DNA,這項專利被美國第三方檢測實驗室執行經理評價為“分子診斷領域十年來的第一項突破性新技術”。Veriflow分子層析檢測具有靈敏度高和簡便易用的特點,通過簡化樣本準備流程、縮短檢測時間和直觀的結果判斷,為用戶提供了各種致病菌、飲料生產和釀酒過程中產生的腐敗菌檢測的新路徑。
    高性價比的Veriflow檢測系統的組成
        Veriflow致病菌和腐敗菌檢測系統由三部分組成:支持快速反應、可等溫亦可變溫擴增的小型、客戶化的96孔PCR儀、Veriflow全套獨立分裝試劑盒(包括預處理試劑、PCR試劑管和掌上型的層析卡盒)和Veriflow多光源定量讀數儀(僅定量檢測時選配)。
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    圖2 Veriflow PCR擴增儀       全套試劑盒     多光源定量儀(選配)
     
    簡便易用的系統,可現場測試并獲得穩定準確的檢測結果
        DNA簽名具有物種特性,且物種越近,簽名越相似。同時,簽名有局部相似性,物種在某方面也具有相似性,即簽名可以表征物種的分類和進化關系。因此,基于PCR檢測技術的Veriflow DNA簽名捕獲技術因其獨特的專利試劑不需要純化樣品和提取DNA,也不需要進行離心操作就能檢測目標微生物,具有高特異性和靈敏度的優勢,可用于各種食品和環境樣品中致病菌的定性或定量檢測。對于限量為25g不得檢出的致病菌一步增菌即可定性;對高污染樣品無需增菌即可進行初始菌含量的定量檢測。
        Veriflow系統僅需簡單的樣品制備和極簡的手工操作,就可以使原本需要2~3天完成的致病菌、腐敗菌檢測工作縮短至3~24小時內完成,并在縮短檢測時間的同時保證準確率,為用戶節約了大量實驗和培訓的時間和費用。
        Veriflow分子層析檢測套裝是美國IS(隱形哨兵)公司專利性、革新性的設計,無需用戶自配PCR反應體系,并對抑制劑有抵抗作用,消除了敏感性酶對樣品凈化的需要,而且擴增不受樣品本身自帶的環境抑制劑的影響。
        Veriflow檢測系統不需要進行以凝膠電泳或熒光定量檢測為基礎的靶擴增,也無需進行復雜的數據分析。掌上型分子層析卡是首個基于垂直流的分子生物學技術,采用DNA簽名捕獲技術,確保高特異性;垂直流的設計,使無損DNA流經毛細管并成功到達檢測線,使檢測具有更高靈敏度和更低檢測限;消除樣液回流造成的假陽性,結果準確可靠;只需要3分鐘,檢測結果便一目了然:一條線表示陰性,兩條線表示陽性(圖3所示),無需使用有內在缺陷的光學檢測系統,無須清除樣品來避免其對光學傳感器的干擾。
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    圖3 陰陽性檢測結果
    AOAC認證和中檢報告證實Veriflow更高準確度,更高特異性和更低檢測限
        Veriflow系統對多達70多種食品的基質、環境采樣和各項檢測項目包括沙門氏菌屬、單核增生李斯特菌、彎曲桿菌屬和大腸桿菌O157:H7、產志和氏毒素大腸桿菌、李斯特菌屬等測試都進行了大量不同菌株的驗證,并獲得了美國公職分析化學家協會AOAC的認證,證實了Veriflow具有100%的包容性、100%的排他性(表1所示)。
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        在AOAC的包容性和排他性實驗中,也驗證了其具有更高的特異性和更低的檢測限(表2所示)。例如,在沙門氏菌屬的排他性實驗中,準確地排除了枸櫞酸桿菌和陰溝腸桿菌這兩種在沙門氏菌常規檢測中難以區分的菌。
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        Veriflow獲得中國檢科院綜合檢測中心(以下簡稱“中檢”)全面證實的致病菌快速檢測系統。中檢對豬肉、雞肉和牛肉、雞蛋、牛奶、沙拉等多種食品基質中的沙門氏菌屬、彎曲菌屬、單核細胞增生李斯特菌屬和大腸埃希氏菌O157:H7進行了自然樣本、添加干擾菌的樣本和添加目標菌的樣本進行了檢測和評估,證實這些檢測項目在不同樣本基質中的準確度,特異性和靈敏度都達到了100%(表3所示)。
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    Veriflow系統的用途和應用
        Veriflow這一創新性的食源性致病菌檢測系統是建立在具有顛覆性意義的新技術基礎上,即將經過證實的微生物檢驗診斷原則和一流的創新科學方法相結合,可以進行沙門氏菌、單核增生李斯特菌、李斯特菌屬、彎曲桿菌、大腸桿菌菌O157:H7、產志賀氏毒素大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血弧菌等多種食源性致病菌的檢測,也可以進行脂環酸芽孢桿菌定量,乳酸菌、小球菌、布魯塞爾酒香酵母菌、德克拉酒香酵母菌的快速定量檢測,廣泛適用于食品、飲料、保健品、釀酒和化工業的原材料、中間產品、生產過程中的關鍵控制點和終產品的快速檢測,并已被食品生產企業、全球第三方檢測實驗室和全球各地的優質酒莊和啤酒廠廣泛采用。
        Veriflow系統帶來了一種新型、超靈敏和用戶友好的診斷測試方法,為政府監督部門和企業提供了一種全新的、有效保障食品安全的檢測工具。
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