• 《食品安全導刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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    轉基因食品檢測

    2014-08-04 14:06:08 來源: 食品安全導刊

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      □ 賽默飛世爾科技(中國)有限公司 供稿

      自1996年轉基因作物商業化以來,轉基因技術研究范圍不斷擴大,轉基因食品也越來越多地走進消費者的生活。2011年,全球轉基因農作物種植面積達到1.6億公頃,大量的轉基因農產品被直接或間接的制成人類的食品,呈迅猛發展的趨勢。以轉基因生物為直接食品,作為原料加工生產的食品,以及喂養家畜得到的衍生食品,在廣義上都可以稱為轉基因食品。我國于2002年3月20日開始實行的《農業轉基因生物標識管理辦法》規定,國家對農業轉基因生物實行檢驗檢疫和標識制度。世界各國均對轉基因食品及其加工產品出具是否為轉基因產品的認定報告。因此轉基因食品的檢測就顯得尤為重要。

      轉基因技術是利用分子生物學技術,將某些生物的基因轉移到農作物中去,改造生物的遺傳物質,使其在性狀、營養品質、消費品質方面向人類所需要的目標轉變。轉基因食品的檢測主要從兩個方面入手,即核酸水平和蛋白質水平,核酸水平主要檢測報告基因、啟動子和終止子,是當前轉基因產品檢測的重要手段。核酸水平的檢測可分為定性和定量兩種。本文分別對賽默飛世爾科技(中國)有限公司(以下簡稱賽默飛)在核酸水平上進行轉基因食品檢測的試劑和儀器進行綜述。

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      轉基因提取試劑盒

      轉基因提取試劑盒(貨號:4466336,見圖1)用來從復雜樣品中提取基因組DNA,繼而用于PCR或其它分子生物學技術。該試劑盒可處理的樣品類型包括原材料、食品成分、加工產品,例如種子、谷物、面粉、大豆粉、肉類、奶制品、果汁等。樣品勻漿后加入合適體積的裂解液1,溫浴裂解后離心去除沉淀,加入蛋白酶K和裂解液2再次裂解,加入乙醇混勻并轉移至過濾柱收集樣品,洗滌洗脫DNA.按照試劑盒操作說明書建議的樣品量和試劑量,可獲得0~10mg基因組DNA,提取產量與樣品加工程度有關,經多次理化加工過的樣品提取DNA量較低(表1)。

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      QuantStudioTM7 Flex實時熒光定量PCR儀

      QuantStudioTM7 Flex實時熒光定量PCR儀(圖2)一如既往地提供了ViiATM7系統所具備的可靠性能、靈敏度和準確性,并采用了全新的工業設計,適用于中等至高通量實時熒光定量PCR,有助于提升實驗室的多功能性。只需一臺儀器即可在96孔、快速96孔和384孔形式或TaqMan® Array微流體芯片之間更換。利用不同的染料、形式和自動化應用潛能,使不同應用之間的切換變得更為簡單。

      較高的應用多樣性——優化的實驗方案和試劑及直觀的軟件可滿足最廣泛的應用要求。

      快速上手——QuantStudio®7 Flex系統直觀的軟件、簡單的觸摸屏設置、自動化集成以及輕松的加熱模塊更換,可以立刻上手操作。

      更快速地獲得更多結果——采用TaqMan®Array微流體芯片和TwisterTM機器人可輕松運行數百個實時熒光定量PCR反應。QuantStudio® 7 Flex系統可在自動化條件下使通量性能最大化。

      模塊靈活性——熱循環模塊可輕松更換,針對不同研究項目可以選擇標準96孔,快速96孔,快速384孔和TaqMan®低密度芯片模塊。定制的TaqMan®低密度芯片(圖3)是一種預置引物探針的384孔微流體芯片,無需液體機器人或多通道移液器裝載樣品即可同時完成384個實時熒光定量PCR反應。這種高度靈活的芯片可以對1~8個樣品平行檢測12~384個TaqMan®目標基因(包括產品對照)。TaqMan®低密度芯片快速、通量高,所需核酸量少,一次可以鑒定多種玉米、大豆等轉基因品系。

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      轉基因篩查試劑盒

      實時熒光定量PCR是檢測食品中轉基因成分最常用的方法,是通過對PCR擴增反應中產物的熒光信號進行實時檢測,對起始模板進行定量或定性分析。賽默飛的TaqMan®轉基因篩查試劑盒(貨號:4466334,圖4)可檢測食品和飼料樣品DNA中主要轉基因元件的存在,并通過對轉基因元件與內源基因進行定量來計算轉基因成分含量。該試劑盒可檢測所有經歐盟批準的轉基因產品以及國際數據庫中所描述的大部分轉基因產品,并于Applied Biosystems所有熒光定量PCR儀上進行過優化。該試劑盒具有靈活、快速、高準確度和高靈敏度的優勢(表1),可對48個樣品分別進行4個獨立的雙重檢測反應,即3組調控區域(P35S/CaMV,P34S/FMV,TNOS/A. tumefaciens)和植物內源基因/內部陽性對照(IPC)。

      另外,賽默飛還有TaqMan®轉基因玉米35S檢測試劑盒(貨號:4327690)和TaqMan®轉基因大豆35S檢測試劑盒(貨號:4327691),利用兩種不同熒光標記的探針分別檢測35S啟動子元件和植物內源基因,從而計算轉基因成分含量。

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