• 《食品安全導刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

    登陸 | 注冊 | 設為首頁 | 加入收藏

    QuEChERS樣品制備方法

    2014-06-27 11:18:16 來源: 《食品安全導刊》

    評論0  我來說兩句
      QuEChERS樣品制備方法應用于LC/MS和LC/UV測定橙汁中多菌靈 和其他康唑類殺菌劑

      □ 沃特世 供稿

      本文討論了橙汁中康唑類殺菌劑(包括多菌靈)的樣品制備策略。首先,使用QuEChERS方法的DisQuE產品進行樣品制備,用以檢測各種水果、蔬菜和果汁中的殺蟲劑含量。結合QuEChERS方法,UPLC/MS/MS可以輕易檢測出10μg/L(ppb)包括多菌靈在內的5種康唑類殺菌劑,且無需進行進一步的樣品制備操作。QuEChERS提取液可以作為前體樣品,然后進一步凈化并使用液相色譜UV檢測器分析其中ppb水平的多菌靈和其他康唑類殺菌劑目標分析物。利用Oasis MCX小柱進行固相萃取(SPE)可對待測物進行富集,并減少基質干擾。該方法通過使用配備UV檢測的液相色譜可完成多菌靈樣品在低ppb水平的準確定量。Oasis MCX凈化操作雖然不是UPLC/MS/MS分析的必需步驟,卻能夠減少基質效應而得到更加潔凈的提取物。因此,使用QuEChERS方法DisQuE產品制備的樣品適用于UPLC/MS/MS直接分析,及經混合模式SPE富集和凈化之后的HPLC/UV測定。

      沃特世解決方案

      Xevo® TQ質譜;ACQUITY UPLC® H-Class系統;ACQUITY UPLC BEH C18柱;XBridgeTM BEH C18XP色譜柱;DisQuETM試劑袋產品;Oasis® MCX萃取柱;LCMS認證樣品瓶。

      實驗

      用作質譜分析的UPLC條件

      系統:ACQUITY UPLC H-Class;

      色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18,2.1×100mm,1.7μm(部件編號:186002352);

      進樣量:10μL;

      溫度:40℃;

      流動相A:0.1%NH4OH水溶液;

      流動相B:0.1%NH4OH甲醇溶液;

      流速:0.40mL/min;

      梯度:流動相B初值為10%,4分鐘內線性梯度增至90%,保持5分鐘,降回至10%B,持續5.1分鐘。保持并再平衡7分鐘。

      用作XP色譜柱UV分析的HPLC條件

      系統:ACQUITY UPLC H-Class;

      檢測:PDA檢測器;

      色譜柱:XBridge C18XP,4.6×100mm,2.5μm(部件編號:186006039);

      進樣量:50μL;

      溫度:40℃;

      流動相A:20mm磷酸鉀水溶液(pH6.8);

      流動相B:乙腈;

      流速:1.3mL/min;

      梯度:25%B的初值保持3.4分鐘,9.7分鐘內線性梯度增至65%B,保持11.0分鐘,然后線性梯度增加至95%,保持13.0分鐘,之后降回至25%B,持續13.2分鐘。保持并再平衡18.3分鐘。

      樣品制備

      使用QuEChERS方法進行初步提?。簩?5mL橙汁樣品加到50mL的離心管內。加入15mL1%乙酸乙腈(ACN)溶液,振搖1分鐘。加入為AOAC QuEChERS方法準備的DisQuE試劑(部件編號186006812),劇烈搖勻1分鐘。然后在3000rpm下離心5分鐘。對不使用固相萃取,直接進行UPLC/MS/MS分析的樣品,將0.5mL上清液加水稀釋至1.0mL。

      SPE凈化:使用Oasis MCX小柱的固相萃取方法可對堿性化合物(例如康唑類殺菌劑)進行凈化。準備進行LC/UV分析前(如果需要凈化樣品),從QuEChERS提取物中取2mL上清液,加入6mL0.01M HCl水溶液,然后混均。使用一根3cc Oasis MCX柱進行固相萃取凈化操作。QuEChERS提取液以酸性水溶液稀釋,從而提高混合模式SPE保留,同時水溶液稀釋增加了反相保留。

      質譜條件

      質譜儀:Waters® Xevo TQ。

      結果與討論

      使用QuEChERS方法能夠在UPLC/MS/MS分析之前有效地萃取康唑類殺菌劑。其中的一種殺菌劑——多菌靈,未經注冊卻被確證出現在市售的橙汁樣品中。本實驗通過質譜分析實現了該化合物在1ppb的水平上的確證,同時LC/UV檢測限也達到了10ppb水平。研究結果顯示,使用了QuEChERS樣品制備方法的DisQuE產品,不僅能夠對康唑類殺菌劑進行有效的UPLC/MS/MS分析,而且通過適當的凈化操作步驟,還能使用LC/UV檢測出較低ppb水平的殺菌劑。

      以上測定結果也驗證了一個重要的結論:對于大部分基質中存在的多種殺菌劑及相關化合物,QuEChERS方法是一種非常有效的樣品制備技術。隨后的樣品凈化程度完全取決于分析人員的需求、檢測方法的靈敏度和特異性。分析過程表明,雖然SPE凈化步驟只是推薦性而非高效率的UPLC/MS/MS分析所必需的過程,但是另一方面,要實現低ppb水平的多菌靈LC/UV測定,則必須進行包括隨后Oasis MCX的固相萃取過程。

      不使用SPE凈化的UPLC/MS/MS

      分析

      通過對每種殺菌劑的10ppb加標(多菌靈為1ppb)橙汁樣品的UPLC/MS/MS重現圖譜的分析,使用外標計算方法得到的五點基質匹配曲線(未示出)中,所有康唑類殺菌劑的相關系數(r2)都大于0.995。根據橙汁基質中制備的3份平行樣品得到的結果測定康唑殺菌劑的回收率,其范圍為92%~110%且相對標準偏差(%)小于7%?;厥章蕦嶒灥木唧w操作方法:分別在QuEChERS萃取之前和萃取后的果汁樣品中進行殺菌劑加標,并將兩者所得的MRM峰面積進行對比?;|效應(抑制比%)由QuEChERS萃取后的殺菌劑加標上清液的MRM峰面積與用50∶50乙腈/水制備的等量殺菌劑標準品峰面積進行對比得出。

      使用SPE凈化的LC/UV分析

      使用SPE凈化的LC/UV回收率與100ppb水平加標樣品的UPLC/MS/MS分析結果相似。圖1是使用XP色譜柱的LC/UV方法測定抑霉唑、腈苯唑和苯醚甲環唑所得的色譜圖。多菌靈和噻菌靈在可見的280nm至300nm處缺少有效發色團;然而在220nm處卻能達到很高的靈敏度,這在很大程度上是因為使用了紫外可穿透的流動相(磷酸鉀)。

    \

      已測樣品的分析

      圖2是對已測橙汁樣品分析得到的LC/UV色譜圖??煽闯鍪褂肙asis MCX小柱可獲得高水平樣品凈化效果。上方為未使用SPE凈化的色譜圖,下方為使用Oasis MCX凈化后的色譜圖。圖3是同時使用QuEChERS方法和Oasis MCX小柱凈化后得到的色譜圖,以及對相同的樣品只使用QuEChERS方法而未使用Oasis MCX小柱凈化的UPLC/MS/MS圖譜。結果吻合度良好,LC/UV檢測到11ppb的多菌靈,UPLC/MS/MS檢測到13ppb的多菌靈。在受檢的橙汁樣品中未鑒別出其他殺菌劑。圖4是已測樣品的UV圖譜與ppb標準品得到的參比圖譜的對比,證實了橙汁樣品中殘留物的存在。

    \

      結論

      DisQuE試劑袋(QuEChERS)能夠有效地從橙汁中萃取康唑類殺菌劑;該方法可提供高通量和低檢測限的分析,分析過程快速、簡單、穩定、安全;QuEChERS提取液可直接用于UPLC/MS/MS分析,而不用進一步凈化;簡潔的Oasis MCX固相萃取流程為低ppb檢測限的多菌靈UV檢測提供了有效的樣品凈化和富集方法;Oasis MCX固相萃取凈化能夠增強UPLC/MS/MS的分析性能,即使這一步驟并非必需過程;經固相萃取凈化后的橙汁樣品中的多菌靈,其LC/UV與UPLC/MS/MS分析結果達到一致。

    微信關注

    相關熱詞搜索:樣品 方法

    [責任編輯:]

    參與評論

    食安中國 Copyright ? www.strettyender.com 2012-2015 版權所有 海淀分局網絡備案編號:1101085079,1101055372京ICP備09075303號-1

    地址:北京市海淀區西四環中路39號萬地名苑2號樓504室(郵編100039) 聯系電話: 010-88825653 業務咨詢:010-88825689

    狠狠久久亚洲欧美专区